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流式細胞術在感染性疾病中的應用

點擊次數:449 更新時間:2025-11-03
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感染性疾病免疫機制


感染性疾病是指由各種生物性病原體(如細菌、病毒、真菌、寄生蟲等)侵害或寄生人體所引發(fā)的疾病。這類疾病具有傳染性和流行性,其發(fā)生和傳播與病原體的致病性、宿主的易感性以及環(huán)境因素密切相關。


近百年來全球五次大規(guī)模傳染病的流行均為呼吸道相關病毒,包括甲型流感病毒(SARS-CoV-2)。病毒感染呼吸道后可誘導固有和適應性免疫應答,觸發(fā)抗病毒免疫和級聯炎癥反應。理想有效的免疫應答可以中和病毒、抑制病毒入侵、及時清除病毒感染的靶細胞、維持炎癥與損傷修復之間適當的平衡,最終得以保證機體的穩(wěn)態(tài)。反之,重癥感染和過度的免疫應答可誘導病理損傷,諸如細胞因子風暴,靶器官炎癥失調等可引起多器官組織損傷和功能衰竭。


流式細胞術可用于分析免疫細胞的亞群分布、活化狀態(tài)和功能。通過檢測免疫細胞表面的標志物,可以評估機體的免疫功能,為感染性疾病的治療提供指導。如在艾滋病診療中,CD4+T淋巴細胞計數是艾滋病分期的核心指標,流式細胞術可動態(tài)監(jiān)測CD4+T細胞水平,評估抗病毒治療效果及免疫重建情況。再進一步的監(jiān)測中,流式細胞術可區(qū)分初始T細胞、記憶T細胞等亞群,揭示免疫恢復的微觀機制,為免疫功能重建不全患者的監(jiān)測提供依據。


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免疫細胞激活的時間范圍



流式細胞術在感染性疾病檢測中具有以下顯著優(yōu)勢:

  • 高靈敏度:可檢測單個細胞的分子變化,早于臨床癥狀出現;

  • 多參數分析:同時評估數十種免疫標記物,繪制“免疫全景圖";

  • 動態(tài)監(jiān)測:實時追蹤治療反應,指導臨床決策;

  • 高通量:每秒可分析數千個細胞,快速處理大量樣本。



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流式細胞在感染性疾病中的檢測項目


01

TBNK淋巴細胞亞群

TBNK細胞是外周血T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞亞群的簡稱,這些細胞是機體免疫功能的重要指標之一,主要用于免疫系統(tǒng)疾病及免疫相關疾病診斷和治療的臨床監(jiān)測。自身免疫疾病發(fā)病、進展以及治療過程中常伴隨著TBNK淋巴細胞數量、比例和功能上的變化。TBNK淋巴細胞亞群檢測能反映機體當前的免疫狀態(tài),輔助疾病診斷,同時對分析疾病的發(fā)病機制、B細胞清除療效評估、副作用及預后監(jiān)測提供參考依據。


TBNK檢測臨床意義

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02

T細胞精細分型

T淋巴細胞起源于骨髓,然后轉移到胸腺中發(fā)育成熟,是機體免疫細胞中數目最多、功能最復雜的一類細胞。


流式細胞分析儀FCM根據淋巴細胞表面標志的不同來檢測T淋巴細胞亞群:初始T細胞(CD45RA+CD27+)、中央記憶T細胞(CD45RA-CD27+)、效應記憶T細胞(CD45RA-CD27-)、終末分化效應記憶T細胞(CD45RA+CD27-)、活化亞群(CD38+)、衰老耗竭亞群(PD1,CD57,CD28)等。通過T淋巴細胞亞群的監(jiān)測可以了解在不同疾病狀態(tài)下患者的細胞免疫功能狀態(tài),已經廣泛在腫瘤、自身免疫、感染性疾病中,輔助臨床診斷、幫助了解發(fā)病機理、判斷預后和指導臨床治療。若外周血中T細胞總數或不同T細胞亞群的絕對數和比值發(fā)生改變,可視為免疫異常。


T細胞精細分型檢測指標

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T細胞亞群報告項目和臨床意義

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03

中性粒細胞指數

CD64是可以識別免疫球蛋白的IgGFc片段I型受體(FcγR1),對IgG單體具有高親和力,介導體液免疫和細胞免疫,對感染性疾病具有早期診斷價值。正常情況下,中性粒細胞表面幾乎不表達CD64。當機體患感染性疾病后4-6小時中性粒細胞表面CD64表達迅速升高,CD64表達可增強中性粒細胞功能,包括細胞吞噬功能。CD64可通過抗體依賴性細胞毒作用、細胞吞噬作用和免疫復合物清除作用實現對病原微生物的清除,可做為感染性疾病良好的診斷依據。


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nCD64指數以1.19為臨界值,判斷是否為細菌感染;≤1.19,判斷為非細菌感染,>1.19,判斷為細菌感染。與革蘭陽性細菌相比,革蘭染色陰性細胞感染時中性粒細胞的CD64表達更高6。膿毒癥發(fā)生發(fā)展過程中,存在一定的免疫抑制現象,免疫抑制現象與炎癥的嚴重程度有一定的相關性。


*由于方案、溶血素、儀器等不同都會造成熒光強度差異,因此不同實驗室在建立此方案時建議重新驗證參考范圍,以達到精確的判讀效果。


04

單核細胞活化

單核細胞HLA-DR(mHLA-DR)的檢測可直接反映該類細胞的抗原呈遞功能,mHLA-DR水平可反映感染性疾病尤其是急重癥患者機體免疫抑制的狀態(tài),是天然免疫監(jiān)測的首要指標;外周血單核細胞表面HLADR/CD14的表達率與感染及疾病的嚴重程度密切相關,可作為判斷急重癥疾病嚴重程度和預后的免疫指標。


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研究發(fā)現,當表達<30%時,存活率降低,認為<30%的表達是膿毒癥免疫抑制的標準。感染者早期單核細胞HLA-DR表達降低,并證明其與嚴重程度評分、繼發(fā)感染及死亡相關。


05

單核細胞亞群

單核細胞根據CD16/CD14進一步分為經典單核細胞(CD14++CD16-,Mo1),主要發(fā)揮吞噬功能、中間單核細胞(CD14++CD16+,Mo2)其主要分泌細胞因子,激活淋巴細胞免疫功能、非經典單核細胞(CD14+CD16++,Mo3),其抗原提呈功能增強。從經典到中間型再到非經典單核細胞存在一種發(fā)展關系,即在感染過程中或使用巨噬細胞集落刺激因子 (M-CSF) 治療時,首先是中間單核細胞增加,然后是非經典CD14+CD16++單核細胞增加。


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CD14++CD16+中間型和CD14+CD16++非經典單核細胞在哮喘、動脈粥樣硬化、心血管疾病、類風濕性關節(jié)炎、癌癥等炎癥性疾病中發(fā)現增加。


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結語:


流式細胞術作為一項*的細胞分析技術,為感染性疾病的臨床診療提供了快速、準確、全面的免疫學檢測手段:


快速診斷:能夠快速檢測和區(qū)分不同種類的感染性疾病;


病情監(jiān)測:可以檢測和量化感染性疾病中的免疫細胞,用于監(jiān)測疾病進展和治療效果;


預后評估:通過免疫細胞功能分析,評估患者預后和感染風險;


治療指導:為個體化治療方案制定提供免疫學依據。


參考文獻(上下滑動閱覽)

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