離心和重懸是細(xì)胞接種前或用于其他實(shí)驗(yàn)前，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行洗滌和濃縮的常規(guī)方法。CHO細(xì)胞通常被認(rèn)為具有較強(qiáng)的耐受性，但它們對(duì)生長(zhǎng)條件有非常特殊的要求，需要專用培養(yǎng)基才能維持最佳的細(xì)胞狀態(tài)。

在以下實(shí)驗(yàn)中，先將細(xì)胞以1000×g的離心力離心5分鐘（此為相對(duì)溫和的離心條件），隨后將其重懸于培養(yǎng)基或緩沖液中，以評(píng)估細(xì)胞制備過(guò)程（若存在影響）對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的作用。

結(jié)果表明，在推薦培養(yǎng)基中進(jìn)行離心和重懸處理，對(duì)CHO細(xì)胞無(wú)顯著影響。然而，在PBS緩沖液中重懸會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活率急劇下降，且細(xì)胞平均直徑顯著減小。此外，細(xì)胞濃度也出現(xiàn)輕微降低，這可能是重懸過(guò)程中細(xì)胞損失所致。若在PBS中再次進(jìn)行離心和重懸處理，會(huì)對(duì)細(xì)胞活率和細(xì)胞大小產(chǎn)生進(jìn)一步的負(fù)面影響。

EL4細(xì)胞通常被認(rèn)為較為脆弱，即使在理想條件下，其生長(zhǎng)速度也較慢，存活率低于70%。本實(shí)驗(yàn)制備EL4細(xì)胞并將其加樣到96孔板中。以標(biāo)準(zhǔn)的Mammalian細(xì)胞類型為基礎(chǔ)，通過(guò)設(shè)置不同的染色吹打次數(shù)，從而建立該細(xì)胞的Cell Type。

本研究的目的是評(píng)估：對(duì)于已知易受渦旋混合和離心作用損傷的細(xì)胞類型，增加吹打強(qiáng)度（若存在影響）會(huì)產(chǎn)生何種影響。

盡管所有樣品的細(xì)胞計(jì)數(shù)、濃度和直徑數(shù)值均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但隨著染色吹打次數(shù)的增加，活細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著下降，細(xì)胞存活率也隨之降低。這表明，減少染色吹打次數(shù)的Cell Type可能更適合此類細(xì)胞，過(guò)度吹打并非理想條件，應(yīng)盡量避免。

即使在理想條件下培養(yǎng)，SF9細(xì)胞也難以達(dá)到較高密度，且其存活率通常低于60%。因此，96孔板檢測(cè)過(guò)程中儀器所需的較長(zhǎng)操作時(shí)間，可能會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生不利影響。為評(píng)估該影響，本實(shí)驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)Insect 細(xì)胞類型檢測(cè)SF9細(xì)胞。

結(jié)果顯示，在3小時(shí)的檢測(cè)過(guò)程中，未觀察到細(xì)胞存活率受到影響。同時(shí)，也未發(fā)現(xiàn)細(xì)胞直徑出現(xiàn)顯著變化（細(xì)胞死亡或腫脹時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)直徑變化）。由此可見，盡管該細(xì)胞系存活率較低，但其耐受性較強(qiáng)，在細(xì)胞培養(yǎng)箱外長(zhǎng)時(shí)間放置也不會(huì)產(chǎn)生不良影響。

對(duì)細(xì)胞施加壓力從而將HeLa細(xì)胞培養(yǎng)至高度匯合狀態(tài)。隨后收集細(xì)胞并制成細(xì)胞懸液，再將其加到96孔板中，采用標(biāo)準(zhǔn)Mammalian細(xì)胞類型檢測(cè)收集分析結(jié)果。檢測(cè)時(shí)按列分析收集96孔板中樣品的檢測(cè)結(jié)果，以確保同一行中各樣品的檢測(cè)時(shí)間間隔一致。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)，96孔板中排在后面檢測(cè)的細(xì)胞樣品，其細(xì)胞濃度略高。進(jìn)一步研究表明，隨著時(shí)間推移，細(xì)胞的平均直徑在增大。

觀察所獲取的圖像可見，出現(xiàn)腫脹或起泡現(xiàn)象的細(xì)胞數(shù)量不斷增加，同時(shí)還存在大量非細(xì)胞囊泡。盡管后者（非細(xì)胞囊泡）通常不影響細(xì)胞計(jì)數(shù)，但根據(jù)細(xì)胞類型的參數(shù)設(shè)置，它們?nèi)杂锌赡鼙挥?jì)為小細(xì)胞。在96孔板檢測(cè)的3小時(shí)過(guò)程中，細(xì)胞腫脹效應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞平均直徑增加了近10%，且可能使部分直徑略低于下限閾值的小細(xì)胞被納入細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍。